1、得到大量的DNA，雖然PCR也可以，但PCR擴(kuò)增有出錯(cuò)率、但你每做一次常規(guī)的PCR，而且每次都要重新提DNA和RNA才行，而且，PCR反應(yīng)的試劑盒又不便宜，用PCR來(lái)制備大量DNA有點(diǎn)得不償失。盡管構(gòu)建克隆載體也存在操作復(fù)雜（相對(duì)于PCR），成功率不是極高，而且還要篩選，但一旦你重組成功并轉(zhuǎn)入了大腸桿菌，你就可以保存了，你想什么時(shí)候用，搖個(gè)菌，就可以制備到大量的DNA。

2、測(cè)序需要。你想轉(zhuǎn)表達(dá)，你首先得確定你擴(kuò)增的目的片段是不是你要的，不要以為你設(shè)計(jì)了個(gè)特異性引物，然后跟你mark的長(zhǎng)度就可以確定了，這也只是推測(cè)，在科學(xué)上不嚴(yán)謹(jǐn)。擴(kuò)增出的基因片段保險(xiǎn)起見(jiàn)或者經(jīng)費(fèi)允許，要拿去測(cè)序，而一般送測(cè)的序列都是構(gòu)建到載體上的序列，克隆載體上一般也都帶有測(cè)序引物，已確定這就是你要的那條序列。你要寫(xiě)論文必須要給人真憑實(shí)據(jù)。